Důležitým rysem všech živých organismů, získaným v procesu evoluce, je schopnost přizpůsobovat se různým vnějším vlivům a změnám prostředí, udržovat homeostázu a regulační procesy v orgánech, systémech a těle jako celku. Moderní metody intenzivního chovu zvířat v různých typech chovů s použitím vysoce užitkových plemen a zavádění technologie průmyslového ustájení se výrazně liší od tradičních metod chovu. Zároveň se často fyziologické schopnosti těla zvířete nejsou schopny měnit tak rychle, jak to vyžadují průmyslové podmínky, což vede ke stresujícímu stavu. Zvíře ve stresu znatelně hubne, slábne, snižuje se jeho odolnost vůči nemocem, zhoršuje se reprodukční schopnost, dochází ke změnám v metabolismu, zejména dochází ke ztrátám energie, která by mohla být využita pro růst a vývoj těla. Bylo zjištěno, že v důsledku stresu u zvířat utrpí chovatelské podniky značné ekonomické ztráty (Hrabovský, 2012; Suprun, 2012; Martyshuk a kol., 2019; 2020; Slivínská a kol., 2020; GrymAk a kol., 2020; Leskiv a kol., 2021; Nazaruk a kol. 2021).
Sortiment veterinárních léčiv a krmných aditiv dostupných na ukrajinském trhu je aktivně doplňován o nové vzorky domácí i dovážené produkce. Dnes se většina tuzemských výrobců veterinárních léků uchýlí k výrobě generických léků (analogových léků) různých farmaceutických skupin. Ke zvýšení odolnosti vůči stresovým situacím, prevenci nemocí, zvýšení odolnosti, bezpečnosti a užitkovosti hospodářských zvířat veterinární specialisté široce používají veterinární léčiva a biologicky aktivní přísady do krmiv (Zhyla a kol., 2015; Chalmeh a kol., 2020).
Soulad se systémem preklinických a klinických hodnocení veterinárních léčiv, který odpovídá mezinárodním požadavkům, je hlavní zárukou pro vývoj účinných, bezpečných a konkurenceschopných léčiv (Saliy a kol., 2020). Je důležité posoudit účinek léku na metabolické procesy v těle zvířete pomocí hematologických, biochemických a imunologických ukazatelů, které objektivně charakterizují jeho bezpečnost, klinický průběh onemocnění a zotavení, projevy nežádoucích účinků a výskyt relapsů (VICH GL9, 2000; Kotsiumbas a kol., 2006; VICH GL43, 2008; Zhyla, 2011; Kotsiumbas a kol., 2013; Zhyla a kol., 2016).
Lék L-Zin, injekční roztok, je léčivý přípravek tuzemské výroby (RS: AB-09278-01-19), jehož účinek je dán kombinací účinných látek na předpis, a to: butafosfamidu, vitamínů B (vitamín B12, vitamín B3) a L-karnitin, ATC veterinární klasifikační kód produktu QA12C. Další minerální přísady, QA12CX91 Butafosfan.
Butafosfan je organická sloučenina fosforu, objevená specialisty Bayer v roce 1926, která ovlivňuje řadu asimilačních procesů v těle zvířat, stimuluje syntézu bílkovin, urychluje růst a vývoj zvířat, normalizuje funkci jater, zvyšuje nespecifickou odolnost organismu, a podporuje tvorbu kostní tkáně. Ve stresových situacích butafosfan normalizuje hladinu stresového hormonu hydrokortizonu, čímž zlepšuje využití glukózy v krvi a pomáhá zachovat energetické zdroje těla (Martyshuk & Gutyj, 2019).
Vitamin B12 (kyanokobalamin) hraje důležitou roli v regulaci funkce krvetvorných orgánů a podílí se na syntéze purinových a pyrimidinových bází a nukleových kyselin nezbytných pro proces erytropoézy. Normální metabolismus bílkovin, tuků a sacharidů není možný bez účasti vitaminu B12.
Účinnost kombinace butafosfamidu a kyanokobalaminu byla studována a popsána v literatuře (Kreipe a kol., 2011; Nuber a kol., 2015; Chalmeh a kol., 2020). Na trhu jsou veterinární léčiva s kombinací butafosfamidu a kyanokobalaminu, např. Katozal (Bayer HealthCare LLC., USA), Cyanofor (Vetsintez LLC, Charkov), Vetozal (O.L.KAR., Shargorod). Známá je i kombinace této kombinace s karnitinem nebo nikotinamidem. Nikotinamid (vitamin B3, (PP)) stimuluje tvorbu nikotinamidadenindinukleotidfosfátu (NADP) a nikotinamidadenindinukleotidu (NAD), které regulují průběh většiny redoxních reakcí, zajišťujících normalizaci mnoha typů metabolismu (včetně energetického). Tento vitamín je přítomen v metabolismu tuků, bílkovin, aminokyselin, purinů, dýchání tkání, glykogenolýzy. Nikotinamid má detoxikační vlastnosti, rychle se distribuuje do tkání a prochází placentární bariérou (Lawrence & Benyt, 1991; Nelson & Cox, 2017). L-karnitin (vitamín B11) je produktem biosyntézy lysinu a methioninu, plní v těle řadu důležitých funkcí, včetně: detoxikace, stimulace metabolických procesů, posílení cév, stimulace regenerace tkání. Jeho užívání napomáhá ke zvýšení odolnosti organismu, zlepšení srdeční činnosti, nárůstu svalové hmoty urychlením metabolických procesů v buňkách, podporuje pronikání vitamínů, minerálů do buněk a odstraňování rozkladných produktů, snižuje riziko tukové degenerace jater (Lawrence & Benyt, 1991; Nelson & Cox, 2017; Tarasenko a kol., 2007).
Vědecky zajímavé je studium účinnosti nové kombinace vyváženého komplexu účinných látek, jako je butafosfamid, vitamín B12, nikotinamid (vitamín B3) a L-karnitin (vitamín B11). Účelem naší práce bylo studium terapeutické účinnosti léku L-Zin u koní jako tonika s originální kombinací čtyř účinných látek pod vlivem různých stresových faktorů: při nadměrném stresu, v rámci komplexní terapie onemocnění různé etiologie.
Materiál a metody výzkumu
Klinické zkoušky léku byly provedeny ve Výzkumném a výrobním centru Komarnovskoe (obec Peremozhnoye, okres Gorodok, Lvovská oblast) na pracovních koních ve věku 5-15 let různého pohlaví. Laboratorní studie byly prováděny v laboratoři klinického a biologického výzkumu Státního vědecko-výzkumného ústavu veterinárních přípravků a doplňkových látek.
K vyřešení tohoto problému byly provedeny dva experimenty: prvním byla studie účinnosti užívání léku L-Zin u koní během období intenzivního cvičení; druhým je studie účinnosti použití léku L-Cin u koně v rámci komplexní terapie při léčbě intoxikací se známkami akutního selhání ledvin.
Pokus 1. Během klinického diagnostického vyšetření hospodářských zvířat na farmě bylo vybráno 5 pracovních koní různého pohlaví a věku. Celkový klinický stav a tělesný stav vybraných zvířat byly uspokojivé.
Vzorky krve byly studovaným koním odebrány před zahájením užívání léku L-Zin a 10. den po posledním podání léku. Lék byl podáván intramuskulárně v dávce 20 ml jednou denně po dobu 1 po sobě jdoucích dnů. Klinický stav pokusných zvířat byl sledován po dobu 5 dnů od začátku užívání drogy.
Pokus 2. Léčba akutní intoxikace u koně. Po klinickém vyšetření nemocného koně byla odebrána krev z krční žíly pro laboratorní vyšetření. Na základě klinických údajů a výsledků krevních testů lékař diagnostikoval intoxikaci se známkami akutního selhání ledvin a předepsal léčbu včetně léků: analgetikum, spasmolytikum, protizánětlivé a antihistaminické a rehydratační terapii. Od 2. dne léčby byl součástí komplexní terapie i námi studovaný lék L-Cin v dávce 25 ml nitrožilně po dobu 5 po sobě jdoucích dnů.
Morfofunkční stav těla zvířete před a po užití léku byl určen klinickým stavem, morfologickými a biochemickými krevními parametry, které byly stanoveny podle obecně uznávaných metod (Lapovets et al., 2011; Vlizlo et al., 2012 Kotsiumbas a kol., 2014). K posouzení celkového stavu a charakterizaci změn hlavních parametrů zvířecího těla byla vybrána řada laboratorních testů, které splňují požadavky na klinické hodnocení léčiv této farmakokinetické skupiny (European Treaty Series/123; VICH GL9, 2000; Levchenko a kol., 2002; Horbatiuk, 2004; VICH GL43, 2008; Lapovets a kol., 2011; Kotsiumbas a kol., 2013). Pro morfologické studie byly použity vzorky koňské krve stabilizované EDTA a pro biochemické studie bylo použito krevní sérum (BS). Hematologické studie (počet erytrocytů, leukocytů, obsah hemoglobinu, hematokrit, erytrocytové indexy (MCHC, MCV, MCH) byly provedeny na automatickém analyzátoru Mythic 18 Vet na principu impedancemetrie. Leukogram byl vyšetřen mikroskopií krevních nátěrů obarvených barvivo Romanovsky-Giemsa.
V krevním séru koní byl stanoven obsah celkových bílkovin, glukózy, urey, kreatininu, aktivita alaninaminotransferázy (ALT), aspartátaminotransferázy (AST), alkalické fosfatázy (AL), laktátdehydrogenázy (LDH), CPK (UC). pomocí poloautomatického biochemického analyzátoru HumaLyzer 3000 s použitím standardizovaných souprav od Human Diagnostics Worldwide (Německo).
Přítomnost a míra signifikantních rozdílů ve studovaných parametrech před a po užití léku ukazuje na závažnost specifického farmakologického účinku léku (CVMP/EWP/81976/2010).
Výsledky a jejich diskuse
První studie diskutovala o účinnosti L-Cin u koní během období intenzivního cvičení. Laboratorní studie před zahájením užívání léku prokázaly, že hodnoty většiny hematologických a biochemických krevních parametrů byly ve fyziologické normě pro zvířata tohoto druhu (tab. 1, 2).
Počet leukocytů byl však na úrovni maximální fyziologické normy a aktivita LDH byla více než dvojnásobná. Taková vysoká aktivita enzymů je zjevně důsledkem chronického fyzického cvičení, protože LDH je enzym v metabolismu sacharidů, přičemž jeho největší aktivita je pozorována v kosterních a srdečních svalech, ledvinách, játrech a červených krvinkách. LDH katalyzuje jednu z nejdůležitějších reakcí glykolýzy – vzájemnou konverzi kyseliny pyrohroznové a mléčné a je důležitým biochemickým diagnostickým testem pro hodnocení práce svalové tkáně v podmínkách anaerobní glykolýzy při fyzické zátěži (Tarasenko a kol., 2007; Lapovets a kol., 2011; Nelson & Cox, 2017).
10. den po použití léku bylo při analýze hematologických parametrů u koní zaznamenáno pravděpodobné zvýšení v normálním rozmezí obsahu hemoglobinu o 12 % (P ≤ 0,05), trend ke zvýšení počtu erytrocytů o 19,4 % a eozinofilů o 41,9 % ve srovnání s ukazateli před podáním léku (tabulka 1).
Při analýze biochemických parametrů v tomto období bylo zjištěno pravděpodobné 4,1násobné (P ≤ 0,05) zvýšení aktivity CK (katalyzuje tvorbu vysokoenergetické sloučeniny kreatinfosfát s ATP a kreatinem, kterou tělo spotřebovává při zvýšené fyzické zátěži). aktivita), 1,6krát (P ≤ 0,05) aktivita AST (aminotransferáza, která vykazuje největší enzymatickou aktivitu v srdečním svalu, je přítomna ve významném množství ve svalech muskuloskeletálního systému a hepatocytech) a 1,6krát nižší (P ≤ 0,05) v aktivitě LDH. Enzymy KK, AST a LDH jsou markery stavu kardiomyocytů a myokardu jako celku (Tarasenko a kol., 2007; Lapovets a kol., 2011; Nelson & Cox, 2017).
Zároveň SC prokázala tendenci ke zvýšení obsahu kreatininu a celkového bilirubinu. Hladiny glukózy a močoviny se významně nezměnily. Stojí za zmínku, že výkyvy všech těchto ukazatelů nepřesáhly jejich fyziologickou normu pro koně (tabulka 2).
Tabulka 1
Hematologické parametry koní při použití léku L-cin, (M ± m, n = 5)
