4.1. Umělá inseminace krav a jalovic ve vazných podmínkách se provádí ve stájích a ve volném ustájení – ve speciálně vybavených kotcích.
4.2. Před umělou inseminací krav a jalovic se konečník zbaví trusu, kořen ocasu a zevní genitál se důkladně omyjí teplou vodou, poté se zavlažují teplým roztokem furatsilinu a osuší se papírovými ručníky. Po provedení těchto činností operátorem umělé inseminace jsou ruce umyty a dezinfikovány 70% roztokem alkoholu nebo furatsilinu. Při toaletě a vyšetření vulvy se navíc používají latexové rukavice.
4.3. Při přenášení nástroje pro umělé oplodnění na místo umělého oplodnění se na něj navlékne hygienická košile, případně se vloží do umělé inseminační rukavice. V chladném období se používá termokryt.
4.4. Umělá inseminace krav a jalovic se provádí metodami: rektocervikální, manocervikální, vizocervikální.
Manocervikální metoda se při umělé inseminaci jalovic nepoužívá.
4.5. Při rektocervikální metodě umělé inseminace se spermie zavádí do děložního čípku přes vagínu pomocí sterilních inseminačních nástrojů, přičemž děložní čípek je fixován přes konečník, podle sledu činností operátora umělé inseminace:
nasaďte si plastovou rukavici, povrch rukavice namažte vazelínou (gelem), zasuňte ruku rotačními pohyby do konečníku a proveďte lehkou masáž dělohy, zatlačením ruky zasunuté do konečníku na horní fornix vestibulu pochvy, mírně otevřete stydké pysky a aniž byste se jich dotkli koncem nástroje pro umělé oplodnění, zaveďte jej 10 – 15 cm pod úhlem 20° – 30°, současně ukazováčkem a prostředníčkem ruky stáhněte hygienickou košili z nástroje pro umělou inseminaci a teprve poté posuňte nástroj pro umělou inseminaci vodorovně k děložnímu čípku;
fixujte kaudální část děložního čípku jedním ze tří způsobů: rukou; mezi ukazováčkem a prostředníčkem; dlaní přitlačení děložního hrdla ke stydkým kostem, pokud není možné zafixovat děložní hrdlo pomocí dvou předchozích metod (aby nedošlo k poranění konečníku, fixace děložního hrdla v období napětí stěny konečníku není přípustné);
fixace děložního čípku rukou, mírné posunutí dopředu, narovnání záhybů v pochvě, posunutí nástroje pro umělé oplodnění do vodorovné polohy a také posunutí dopředu;
ovládání otevírání cervikálního kanálu palcem nebo malíčkem (podle způsobu fixace), zavádění nástroje pro umělé oplodnění do kanálu;
uchopte děložní čípek celou dlaní, zvedněte jej nad pánevní dno a opatrnými pohyby doprava, doleva, nahoru, dolů zatlačte na nástroj pro umělé oplodnění, polohu kontrolujte prsty, zatlačte do děložního čípku, aby hloubka 6 – 8 cm, dokud nevstoupí do těla dělohy;
pomalu stiskněte píst, vytlačte spermie a zároveň mírně zatlačte hrot nástroje pro umělé oplodnění, rovnoměrně rozmístěte spermie podél cervikálního kanálu;
nástroj pro umělé oplodnění opatrně vyjměte z pochvy, při použití ampuli neuvolňujte, dokud nástroj pro umělé oplodnění nevyjmete z děložního čípku;
proveďte lehkou masáž děložního čípku a vyjměte ruku z konečníku;
zlikvidujte použitý jednorázový nástroj na umělé oplodnění a rukavici;
Po umělé inseminaci musí být zvířata v kotci 1 – 2 hodiny.
4.6. Při manocervikální metodě umělého oplodnění se spermie vloží do děložního čípku ručně přes vagínu pomocí sterilního nástroje pro umělé oplodnění, přičemž se postupuje podle sledu činností operátora umělé inseminace:
nasaďte si plastovou rukavici, navlhčete ji 0,9% roztokem chloridu sodného (fyziologický roztok) nebo 1% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (roztok sody);
opatrně vložte ruku do pochvy krávy a určete stupeň dilatace děložního čípku, masírujte děložní čípek;
vytažením ruky do poloviny z pochvy do ní druhou rukou vložte připravený nástroj pro umělé oplodnění, zasuňte ruku do děložního čípku a pod kontrolou ukazováčku zatlačte katétr do cervikálního kanálu do hloubky 1,5 – 2 cm;
masírujte děložní hrdlo konečky prstů, zatlačte na ampuli dlaní, dokud katétr zcela (6 – 7 cm) nevstoupí do cervikálního kanálu;
zvedněte ampulku o 2 – 3 cm nahoru a palcem a ukazováčkem z ní vytlačte spermie, začněte od horního rohu dna a pohybujte tlakem směrem k hrdlu ampule;
po úplném zavedení semene vyjměte katétr z cervikálního kanálu bez uvolnění ampule a ponechejte nástroj pro umělé oplodnění na dně pochvy a navíc masírujte děložní čípek po dobu 1 – 2 minut;
vyjměte ruku s nástrojem pro umělé oplodnění z pochvy;
Jednorázový nástroj na umělé oplodnění a rukavici zlikvidujte.
4.7. Při visocervikální metodě umělé inseminace se spermie zavádí do cervikálního kanálu pomocí vaginálního zrcátka podle sekvence úkonů operátora pro umělé oplodnění:
před umělým oplodněním zahřejte poševní zrcátko na teplotu 38 – 40 °C, důkladně otřete osvětlovač tamponem namočeným v 96% alkoholu, těsně před umělým oplodněním propláchněte osvětlovač a poševní zrcátko teplým (38 – 40 °C ) 0,9% roztok chloridu sodného (fyziologický roztok);
nasaďte si plastovou rukavici;
otevřete stydké pysky, držte vaginální zrcátko s iluminátorem s držadly na stranu, vložte je do pochvy, dokud se nezastaví. Otočte poševní zrcátko rukojetí dolů a opatrně rozevřete větve, najděte děložní hrdlo a do jeho kanálku zaveďte nástroj pro umělé oplodnění do hloubky 4 – 6 cm.
4.7.1. Při vizocervikální metodě umělé inseminace krav a jalovic můžete pro umělou inseminaci použít jakýkoli nástroj kromě katétru pro manocervikální metodu, a to při dodržení sledu úkonů operátora pro umělou inseminaci:
pomalu zavádějte spermie a vyjměte nástroj pro umělé oplodnění;
opatrně otočte poševní zrcátko s rukojetí do stran, s ne zcela uzavřenými větvemi, vyjměte je z pochvy;
Jednorázový nástroj na umělé oplodnění a rukavici zlikvidujte.
Po inseminaci každé krávy a jalovice se poševní zrcátko promyje teplou převařenou vodou, promyje se teplým 2 – 3% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (roztok sody) a poté se dezinfikuje varem nebo flambováním.
4.8. Pro umělou inseminaci krav a jalovic lze použít zrcadla různých velikostí.
Před inseminací je kráva fixována v kotci a toaleta (vnější genitál se omyjí tamponem, čistou teplou vodou z hrnku Esmarch, zavlažují roztokem furatsilinu nebo furazolidonu, otře do sucha) zevního genitálu. Poté si umyjí ruce a vydezinfikují je roztokem furatsilinu nebo alkoholem, otřou je tamponem, vezmou sáček s pipetami, otřou tamponem navlhčeným v 96% alkoholu, přestřihnou sterilními nůžkami nebo propíchnou roh sáčku konec pipety.
Po prodloužení pipety na 1/3 délky ji připojte k prázdné sterilní ampuli, jejíž víčko se nejprve odstřihne sterilními nůžkami, nebo ke sterilní injekční stříkačce pomocí pryžové nebo polyetylenové spojky nebo k balónku a úplně vyjměte pipetu. Roztržený sáček s pipetami se těsně po vyjmutí každé pipety zataví nad plamenem alkoholové lampy nebo zápalky. Vezměte ampuli se spermatem, otřete ji tamponem navlhčeným v 96% alkoholu, odřízněte ji ode dna a poté z ní odsajte sperma do pipety, vymáčkněte a uvolněte připojenou prázdnou ampuli.
Pokud se sperma dodává nebo rozmrazuje (granule) v lahvičkách, odebere se 0,5 – 1,0 ml z lahvičky do pipety. (před nasátím do pipety je nutné spermie promíchat opatrným otáčením ampule nebo lahvičky).
Při dodání v kapilárních brčkách (payettech) se rozmrazí, poté se otevřený konec kapiláry připevní pomocí polyetylenové spojky ke zkrácené polystyrénové pipetě napojené na injekční stříkačku a volný konec se propíchne sterilní jehlou.
Nástroje připravené k inseminaci jsou umístěny na sterilním stojanu. Na podložní sklíčko se vytlačí kapka spermatu, navrch se přiloží krycí sklíčko a pod mikroskopem se stanoví aktivita. Když je vše připraveno, palcem a ukazováčkem jedné ruky, oblečené v plastové rukavici, otevřete soukromé pysky zvířete a aniž byste se dotkli vnějších genitálií pipetou, vložte ji druhou rukou do pochvy, dokud nebude připojena ke stříkačce. (ampule, sprej).
Po zavedení pipety do pochvy se ruka v plastové rukavici navlhčí teplou vodou a zavede se do konečníku, druhou rukou se pipeta mírně posune do strany. Pokud se pipeta na cestě do poševní části děložního hrdla dostane do poševní rýhy, pak se děložní hrdlo s rukou zasunutou do konečníku posune mírně dopředu (směrem k hlavě zvířete), což vede k napětí v poševních stěnách a napřímení ze záhybů.
Poté, co se ujistíte, že konec pipety leží blízko otvoru děložního čípku, začněte vyšetřovat dělohu a vaječníky. Pokud je při vyšetření zjištěna březost nebo jsou zaznamenány abnormality na pohlavních orgánech, zvíře by nemělo být inseminováno. Konečnou diagnózu musí stanovit veterinární lékař.
Je třeba mít na paměti, že děložní čípek nemůže být fixován během období napětí střevní stěny, protože je možné poranění jeho sliznice nebo perforace. Uvolnění napětí dosáhneme lehkým hlazením sliznice.
Po vyšetření je vaginální část děložního čípku fixována celou rukou. V tomto případě je otevření děložního čípku cítit malíčkem nebo palcem a pipeta je nasměrována pod jeho kontrolou. Poté, co se ujistíte, že pipeta vstoupila do otvoru, opatrně lehkými rotačními pohyby, aby nedošlo k poškození příčných záhybů sliznice, se děložní čípek přetáhne přes pipetu. Po zasunutí pipety do hloubky 6–8 cm pomalu zatlačte na ampuli nebo píst katétrové stříkačky a zároveň pipetu mírně táhněte zpět. Poté, aniž byste otevřeli ampuli prsty nebo aniž byste vytáhli píst, se pipeta opatrně vyjme z pochvy a ruka z konečníku.
Při fixaci není možné uchopit tělo dělohy a ne samotný děložní čípek; V tomto případě poševní část děložního čípku spadne dolů a konec pipety je obtížné zasunout do jejího otvoru.
Pokud nejsou k dispozici jednorázové plastové nástroje, lze použít skleněné pipety s pryžovými zásobníky a gumové rukavice. Po použití se všechny tyto předměty důkladně umyjí a sterilizují ve vroucí vodě.
