Kostní dřeň je základním místem hematopoézy u malých domácích zvířat, což je proces řízený růstovými faktory a cytokiny a podporovaný normálním mikroprostředím kostní dřeně. Tvorbu buněčného složení krve ovlivňuje také mnoho faktorů, včetně hormonálních, fyziologických a metabolických charakteristik těla pacienta, proto řada změn v jeho stavu může vyvolat určité stavy kostní dřeně, které se přímo odrážejí v obrázek periferní krve zvířete. Zánětlivé reakce tak například způsobují zcela přirozenou hyperplazii granulocytární řady. Anémie může být zase v závislosti na přítomnosti nebo nepřítomnosti regenerační reakce doprovázena hyperplazií nebo hypoplazií erytroidního zárodku, v závislosti na faktorech, které je způsobují. V kostní dřeni samotné se také mohou vyvinout patologické procesy, které přímo ovlivňují její fungování, včetně neoplastických, imunitně zprostředkovaných a idiopatických mechanismů.

  1. Příprava pacienta
  2. Indikace a kontraindikace
  3. Interpretace a forma výstupu výsledku

Indikací k cytologickému vyšetření kostní dřeně jsou hematologické poruchy projevující se v cytopeniích jedné nebo více linií bez zjevné základní příčiny a dále přítomnost buněk s atypickou morfologií cirkulujících v periferní krvi. Indikací k odběru kostní dřeně může být také přetrvávající zvýšení počtu periferních krevních buněk té či oné linie bez základní příčiny (neutrofilní posun doleva bez přítomnosti zánětu, těžká trombocytóza s přítomností makrodestiček nebo trombocytů s atypickou morfologií), často je však možné při zkoumání materiálu z takových zvířat pozorovat výraznou hyperplazii jednoho či druhého výhonku, což nesvědčí o jednoznačné etiologii procesu, při vyšetření kostní dřeně však mohou být dysplastické změny v té či oné buněčné linii posuzovat.

V případě regenerační odpovědi se vyšetření kostní dřeně nedoporučuje, stejně jako v případě neregenerativní anémie způsobené mechanismy neovlivňujícími kostní dřeň (chudokrevnost chronických onemocnění, chronické onemocnění ledvin, endokrinopatie). Velké množství červených krvinek s jádry bez známek polychromázie a retikulocytózy v kombinaci s přítomností velkého počtu nezralých granulocytů cirkulujících v krvi označuje leukoerytroblastózu a může naznačovat poškození kostní dřeně, včetně neoplastické infiltrace. Vyšetření kostní dřeně často poskytuje diagnózu při podezření na hematopoetické novotvary, jako jsou myeloidní a lymfoidní leukémie, plazmocytární nádory (mnohočetný myelom) nebo histiocytóza.

Stanovení stadia nádorového procesu a posouzení účinnosti chemoterapie může také vyžadovat vyšetření kostní dřeně na přítomnost diseminace primárního nádoru, což je důležité zejména u mastocytomů a lymfomů. Mezi další indikace aspirace kostní dřeně patří hyperkalcémie, hyperproteinémie a horečka neznámého původu, stejně jako podezření na infekci patogeny, jako je mykobakterióza, leishmanióza, cytozoonóza a histoplazmóza.

V případech neregenerativní imunitně zprostředkované anémie s progenitorovým záchvatem (PIMA) může nález fagocytózy erytroidních progenitorů v kostní dřeni poskytnout vodítko k diagnóze u pacienta, zejména vzhledem k tomu, že navzdory imunologické povaze onemocnění Coombsův test bude pozitivní u poloviny těchto zvířat negativní.

ČTĚTE VÍCE
Jak krmit kotě bez výživy?

Při podezření na hematologické poruchy v důsledku závažných hypoplazií a aplazií jedné nebo více linií kostní dřeně nemusí cytologické vyšetření poskytnout úplný obraz kvůli velmi malému počtu získaných buněčných elementů. Za těchto stavů může být vhodné odebrat bioptické vzorky z kostní dřeně s následným histologickým vyšetřením, které umožňuje objektivnější posouzení celkové cytózy, stejně jako v případech s myelofibrózou, nekrózou, želatinovou transformací a osteosklerózou, k vizualizaci přítomnost těchto poruch a rozsah jejich distribuce v tkáni kostní dřeně.

Další metody barvení na hemosiderin v kostní dřeni umožňují odhadnout celkové množství zásob železa v těle u psů (u koček železo v kostní dřeni normálně chybí), nicméně toto hodnocení je subjektivní a mělo by být provedeno s přihlédnutím k věku zvířete. Zvýšení množství železa v kostní dřeni lze pozorovat u zvířat s hemolytickou anémií, dyserytropoézou, anémií chronických onemocnění v důsledku jeho sekvestrace v makrofázích a také po krevních transfuzích.

Cytologické vyšetření kostní dřeně je tedy integrální metodou pro širokou škálu patologií, zejména těch souvisejících s hematologickými poruchami, které lze v první fázi registrovat při rutinním klinickém vyšetření krve.

Protože kostní dřeň přímo odráží poměr buněčných elementů v krvi, je kritickou podmínkou pro její studium poskytnutí podrobného klinického rozboru krve pacienta s leukémií, posouzení počtu retikulocytů a biochemický rozbor (nejlépe). užité v období ne delším než 24 hodin od odběru kostní dřeně. Jinak bude interpretace poměru myeloidní/erytroidní extrémně obtížná a hodnota studie bude výrazně snížena.

Termíny: 10 dní (plus 1-2 dny pro regiony).

Testovaný analyt: sklíčka s nátěry kostní dřeně, kostní dřeň ve zkumavce s EDTA.

Metoda výzkumu: cytologické vyšetření po barvení.

Příprava pacienta: není nutná žádná speciální příprava. Pokud se očekává sedace, nekrmte zvíře v den odběru biomateriálu. Zastřihněte chloupky v místě zamýšlené punkce a ošetřete povrch pokožky antiseptikem.

  • cytosy neznámého původu (leukocytóza, trombocytóza, polycytémie);
  • identifikace v krevním nátěru buněk s atypickou morfologií a buněk, které normálně chybí (blastové buňky, granulární lymfocyty, mastocyty atd.);
  • hypertermie neznámého původu;
  • hyperkalcémie, hyperproteinémie;
  • přesné stanovení stadia nádorových onemocnění (lymfomy, mastocyty);
  • diagnostika lymfo-/myeloidní leukémie a dalších nádorů, vč. metastázy solidních nádorů v RMC;
  • hodnocení zásob železa (sérové ​​železo, feritin, celková vazebná kapacita séra pro železo pro zvířata nejsou příliš specifické).
ČTĚTE VÍCE
Jak se herpes projevuje u koček?

Kontraindikace:

  • kontraindikace pro celkovou/lokální anestezii;
  • u zvířat s těžkou trombocytopenií dochází ke krvácení (zastaveno přiložením tlakového obvazu a ledu);
  • byly popsány ojedinělé případy infekce v místě odběru;
  • implantační metastázy podél dráhy jehly během punkce BCM nebyly popsány.

Není důvod odebírat kostní dřeň zvířatům s regenerativní anémií bez přidružených známek vyžadujících vyšetření kostní dřeně na související patologii.

Způsob výběru: Odběr materiálu z kostní dřeně na cytologické vyšetření vyžaduje určitou zručnost a provádí se různými technikami. Pacient zpravidla vyžaduje sedaci, a proto je třeba brát v úvahu anestetická rizika. Efektivní je výběr z proximální části humeru nebo proximální epifýzy femuru.

Potřebné nástroje:

  • trephines pro kostní tkáň (lze použít jak k odběru CMC, tak k získání vzorku samotné kosti, např. při podezření na osteosarkom);
  • Jehly typu Rosenthal, Yamshidi, IL (tloušťka 16G-18G, 11G pro velké psy);
  • sterilní stříkačka 5-20 ml (obvykle 10 ml);
  • zkumavka s EDTA;
  • sérologická nebo automatická pipeta;
  • Petriho miska;
  • čisté, suché sklenice (minimálně 10 kusů).
  • aseptická příprava místa vpichu (oholit vlasy, ošetřit alkoholem);
  • navíc lokální anestezie, navzdory stávající celkové/lokální anestezii (1 % lidokain, 2 % novokain), vrstva po vrstvě („citronová kůra“), včetně periostu;
  • počkejte 1-2 minuty;
  • proveďte malý kožní řez asi 1 cm;
  • zapíchněte jehlu do okostice, poté otočte, dokud se nezdaří, tzn. předtím, než jehla projde kortikální vrstvou kosti;
  • připojte stříkačku k jehle a natáhněte CMC (asi 1 ml, ne více: čím silněji pumpujete, tím větší je hemodiluce);
  • IHNED nalijte punctate do zkumavky s EDTA, dobře promíchejte;
  • nalijte ze zkumavky s EDTA do čisté Petriho misky, misku nakloňte o 45-60 stupňů (tím dojde k oddělení materiálu: tekutá krev stéká, v horní části se zdržují hrudky kostní dřeně a tuku);
  • naberte hrudku pipetou (například Pasteurovou pipetou), přeneste ji na čisté podložní sklíčko, přikryjte ji druhým podložním sklíčkem, natáhněte sklenici v různých směrech (180 stupňů), přičemž se hrudka mezi nimi tře (tato technika se nazývá „squash“);
  • Nátěr by měl být tenkou monovrstvou; je třeba se vyhnout silnému tlaku, protože buňky mohou být zničeny; Hotový nátěr dobře vysušte na vzduchu a připravte jej k odeslání do laboratoře;
  • Je lepší udělat 8-10 úderů z různých hrudek;
  • Pokud v nakloněné Petriho misce nejsou nalezeny žádné hrudky, pak je punkce neúspěšná (sbírali jste pouze krev) a budete muset výběr opakovat.
  • aseptická příprava místa vpichu (oholit vlasy, ošetřit alkoholem);
  • navíc lokální anestezie, navzdory stávající celkové/lokální anestezii (1 % lidokain, 2 % novokain), vrstva po vrstvě („citronová kůra“), včetně periostu;
  • počkejte 1-2 minuty;
  • Připravte sklenice: postavte je svisle na stativ. To má umožnit odtok přebytečné krve, zatímco kostní dřeň, která vypadá jako tuk, zůstává na vrcholu sklenice;
  • proveďte malý kožní řez o délce 1 cm;
  • zapíchněte jehlu do okostice, poté otočte, dokud se nezdaří, tzn. předtím, než jehla projde kortikální vrstvou kosti;
  • připojte stříkačku k jehle a pumpujte CCM (dokud se neobjeví první kapka (důležité!), čím silněji pumpujete, tím větší je hemodiluce);
  • Dále se nasbíraný materiál rychle aplikuje na brýle umístěné svisle ve stativu. Přebytečná krev stéká dolů, zatímco asistent nebo lékař pomocí druhé sklenice natáhne preparát (vypadá jako tuk), který nestéká, ale zůstává nahoře ve sklenici;
  • Preparát je nutné velmi rychle natáhnout, aby se nekroutil.
ČTĚTE VÍCE
Proč jedné kočce uniká oko?

Předanalýza:

K žádosti o doporučení je nutné přiložit výsledek obecného klinického krevního testu odebraného současně s kostní dření (výsledek obecného krevního testu odebraného 1 den před nebo 1 den po povolení kostní dřeně), jakož i retikulocytový test, pokud byl proveden. Pokud nebyl v den odběru kostní dřeně proveden obecný klinický krevní test, je nutné odeslat periferní krev ve zkumavce s lila/růžovým uzávěrem (EDTA). Pořadí manipulací je stejné jako u testu AN5. Odešlete na samostatném formuláři.

  • Odebírání biomateriálu podle výše uvedených doporučení, dodržování pravidel asepse/antiseptik.
  • Připravte si 8-10 nátěrů kostní dřeně, podepište (druh, jméno zvířete, příjmení majitele), nechte zaschnout, vložte do přepravní nádoby). Vložte zbytky kostní dřeně do zkumavky s EDTA, podepište „KM“, typ, jméno zvířete.
  • Současně s odběrem kostní dřeně odeberte krev do zkumavky s EDTA jako u testu AN 5. Bez žilní krve nebude materiál přijat do práce! Skladovatelnost vzorku je 5 dní, zkumavka s EDTA 3 dny. Před odesláním do laboratoře skladujte nátěry při +20 °C. +25 ℃, plná krev +2 ℃. +8℃.
  • Vyplňte všechna pole formuláře doporučení na OBOU stranách! Bez údajů o anamnéze nebude pracovní materiál přijat!
  • Teplotní podmínky pro transport do laboratoře +2 ℃. +8℃ (modré balení).

Normální vzdálenost:

  • Saturace buněk (v závislosti na věku pacienta): 25-75 % krvetvorných buněk, zbývající podíl tvoří buňky tukové tkáně.
  • Megakaryocyty: 2-7 na zorné pole při velkém zvětšení a jejich počet se výrazně liší; jejich skutečné množství se může široce lišit v závislosti na způsobu přípravy léčiva.
  • Poměr M/E: 0,75-2,53 (u psů) a 1,21-2,16 (u koček).

Možné patologické změny:

  • Zvýšené množství železa v kostní dřeni (interpretováno v závislosti na věku) – hemolýza, předchozí krevní transfuze, anémie v důsledku zánětlivého onemocnění, parenterální podávání železa.

Vysoké hodnoty (hyperplazie):

  1. Celková saturace buňkami – proliferativní reakce na stimulaci z periferních částí, anémie a/nebo hypoxémie (erytroidní hyperplazie); zánětlivý proces (hyperplazie granulocytů); trombocytopenie necentrálního původu (hyperplazie megakaryocytranu); neoplazie (primární nebo metastatické), akutní a chronická leukémie, stadium lymfomu (v); maligní histiocytóza; mastocytóza.
  2. Červené krvinky – účinná erytroidní hyperplazie v reakci na anémii a/nebo hypoxémii (obvykle hemolýza, krevní ztráta), polycytémie, reakce na podání erytropoetinu; neúčinná erytroidní hyperplazie – nedostatek folátu, těžký nedostatek železa, dědičná porucha metabolismu B12, některé myeloproliferativní a myelodysplastické poruchy, vrozená dyserytropoéza, imunitně zprostředkovaná hemolytická anémie při napadení erytroidních prekurzorů v kostní dřeni.
  3. Neutrofily – účinná granulocytární hyperplazie jako proliferativní reakce, často jako odpověď na bakteriální zánět, stejně jako imunitně zprostředkovaný proces, nekróza, u psů s deficitem adhezních molekul β2-integrinu, u šedých kolií s cyklickou hematopoézou, časná estrogenní toxicita ( se současnou erytroidní a megakaryocytranovou aplazií), paraneoplastická neutrofilie, chronická myeloidní leukémie, odpověď na léčbu GCSF; neúčinná granulocytární hyperplazie – myelodysplastické poruchy, neutropenické kočky infikované VLK a/nebo FIV, imunitně zprostředkovaná neutropenie s útokem na zralé buňky, psi užívající antikonvulziva, kteří mají periferní neutropenii, infekce kostní dřeně.
  4. Eozinofily – parazitární onemocnění (zejména infekce háďátky a motolicemi během migrace), zánětlivý proces v orgánech bohatých na žírné buňky (kůže, plíce, střeva, děloha), alergické reakce z přecitlivělosti zprostředkované IgE (zamoření blechami, kočičí astma, psí eozinofilní bronchopneumonie), eozinofilní granulom, hypereozinofilní syndrom, eozinofilní leukémie, myelodysplastické poruchy, tumor mastocytů a méně často i jiné tumory (paraneoplastická eosinofilie).
  5. Bazofily – obvykle se vyskytují u stejných poruch, které vedou k eozinofilii, dirofiláriím (u psů a koček), bazofilní leukémii, myelodysplastickým poruchám.
  6. Megakaryocyty – primární a sekundární imunitně zprostředkovaná trombocytopenie, probíhající intravaskulární koagulace, hypersplenismus, cévní poškození, infekce (např. rané stadium parazitární infekce Ehrlichia canis) a toxikózy způsobené destrukcí krevních destiček, konzumní trombocytopenie, anémie z nedostatku železa, esenciální trombocytémie.
ČTĚTE VÍCE
Proč se pes zlobí?

Snížené množství železa v kostní dřeni je absolutní nedostatek železa, jeho absence je u koček normální.

Nízké hodnoty (hypoplazie):

  1. Obecná celularita – generalizovaná hypoplazie/aplázie, účinek některých antibiotik (například cefalosporiny atd.), exogenních nebo endogenních estrogenů (u psů a fretek), účinek antikonvulziv (například fenobarbital), účinek fenylbutazonu ( u psů) a griseofulvin (u koček), účinky thiacetarsamidu, kyseliny melofenamové, chinidinu (možná příčina u psů), účinky albendazolu, chemoterapie, ozařování, myelonekróza (může vést k degenerativním buněčným elementům), myelofibróza, psí a kočičí parvovirová infekce (hypoplazie erytroidních a myeloidních buněk), kočičí virová leukémie, těžké poškození při manifestaci Erllichia canis, primární imunitně zprostředkovaná destrukce prekurzorů krvetvorných buněk (např. čistá erytroidní aplazie), idiopatické.
  2. Červené krvinky – selektivní erytroidní hypoplazie, u šedých kolií s cyklickou hematopoézou (s následným rozvojem erytroidní hyperplazie), vliv chloramfenikolu (zejména u koček), lymfocytární leukémie, imunitně zprostředkovaná hypoplazie postihující časné erytroidní progenitorové buňky, imunitně zprostředkovaná hypoplazie spojená při léčbě rekombinantním erytropoetinem, virová leukémie koček (typ C), u psů s idiopatickou myelofibrózou, anémie při zánětlivých onemocněních (se současnou granulocytární hyperplazií), endokrinopatie (například hypotyreóza atd. – obvykle se poměr M/E nezvyšuje) , chronické onemocnění ledvin (obvykle se poměr M/E E nezvyšuje).
  3. Neutrofily – selektivní hypoplazie neutrofilů, účinek azathioprinu (u koček), účinek griseofulvinu (při léčbě dermatofytózy u koček je riziko vyšší u koček infikovaných FIV), podání rekombinantního G-CSF odebraného zvířeti jiného druhu , psí nebo kočičí parvovirová infekce, cyklická hematopoéza, indukovaná VLK, imunitně zprostředkovaná hypoplazie (napadením časných prekurzorů).
  4. Megakaryocyty – selektivní hypoplazie megakaryocytů (vzácný jev), imunitně zprostředkovaná, způsobená působením léků (hypoplazie bývá generalizovaná, lze pozorovat potlačení pouze řady megakaryocytů), vliv léků (kyselina meklofenamová, fenylbutazon, trimethoprim – sulfadiazin ).

Formulář výsledku: Formulář obsahuje popis cytologického složení materiálu kostní dřeně, posouzení morfologie a sekvence zrání buněčných elementů, výpočet poměru myeloid/erytroid, závěr a komentář, který srovnává obraz klinické krve a kostní dřeně v době studie a indikuje pravděpodobné příčiny konkrétního stavu.

Seznam zdrojů:

  1. Hodnocení kostní dřeně u psů a koček, Wellman, Maxey L. Radin, M. Judith.; Ralston Purina Company, 1999;
  2. Veterinární hematologie, Diagnostický průvodce a barevný atlas, John W. Harvey, DVM, PhD, DACVP, 234-318;
  3. Cytologické a histologické biopsie kostní dřeně: indikace, technika a hodnocení, Raskin RE, Messick JB., Vet Clin North Am Small Anim Pract. leden 2012;42(1):23-42;
  4. Odběr a hodnocení aspirátů kostní dřeně a jádrových biopsií psů, COSMIN PEŞTEAN, ADRIAN TODOR, OANA FLORESCU a další, Annals of R.S.C.B., Vol. XXII, číslo 1, 2017, str. 44 – 48;
  5. S. Vaden, D. Knoll, F. Smith, L. Tilley. Kompletní průvodce laboratorními a instrumentálními studiemi psů a koček.