Detekce Giardia antigenu ve stolici metodou ELISA ELISA
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA, synonymum v angličtině – ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay) se provádí pro rychlou kvalitativní detekci Giardia antigenu ve vzorcích lidské stolice za účelem diagnostiky giardiózy.
giardiasis – onemocnění trávicího ústrojí, původcem je prvokový jednobuněčný organismus Giardia lamblia.
Životní cyklus Giardia sestává ze stadia cysty a vegetativního stadia (trofozoit). Cysty při vstupu do těla obcházejí žaludek a vlivem duodenálního obsahu se v horní části střeva uvolňují pohyblivé trofozoity (jsou schopné rozmnožování a existence v tenkém střevě). Trofozoiti za určitých podmínek ztrácejí svůj tvar a znovu vytvářejí stadium cysty, které je v klidu. Cyklus končí, když se zralé cysty (velikost 12 mikronů a oválné) dostanou s výkaly do vnějšího prostředí a jsou schopny infikovat nového hostitele.
Indikace pro analýzu
Důvodem pro předepsání analýzy jsou příznaky giardiázy:
- psychosomatické poruchy;
- chronická onemocnění, poškození gastrointestinálního traktu;
- alergické reakce, dermatitida, ekzém, kopřivka;
- dysbakterióza, průjem neznámé etiologie;
- zaostávání ve fyzickém vývoji, podvýživa.
Giardia antigen je určen pro:
- detekce přenašečů parazitů;
- detekce giardiózy akutních a chronických forem;
- diferencovaná diagnostika onemocnění s podobnými klinickými příznaky (virový nebo bakteriální průjem);
- sledování účinnosti léčby giardiázy (jeden týden po jejím ukončení).
Metodologie analýzy
Pro analýzu není nutná žádná speciální příprava. Je nutné sbírat biomateriál – výkaly. Je umístěn ve sterilní nádobě. Vzorek by měl být odebrán z několika míst v malých množstvích.
Během prvního kultivačního testu protilátky přidané do vzorku přitahují antigeny Giardia nalezené ve stolici. Během druhé inkubace další typ protilátky sevře antigen parazita dohromady. V následné inkubaci jsou odstraněny další protilátky, které nereagovaly s konjugátem a anti-protilátky a peroxidáza. Poté se nenavázané enzymy z materiálu odstraní promytím a přidá se chromogen, který při reakci s enzymovým komplexem a peroxidem získá modrou barvu. Stop roztok inhibuje reakci a barva se změní z modré na žlutou.
Interpretace výsledku analýzy
Interpretace diagnostických výsledků se provádí vizuálně a pomocí kontrolní čtečky.
1.Vizuální.
Pozitivní jamka má tmavší žlutou barvu než negativní jamka. V případě negativního výsledku je barva jamky testovaného vzorku světlejší než žlutá.
2. Ovládání čtečky.
Je nutné vynulovat čtečku. Odečtěte všechny jamky při 450/620-650 nm. Při pozitivním výsledku se absorbance odečte od 0,08 jednotek. OP a výše. To ukazuje na přítomnost Giardia antigenu. Negativní výsledek ukáže absorbanci menší než 0,08 jednotek. OP. To potvrzuje nepřítomnost detekovatelných hladin Giardia antigenu.
Paraziti mají hustší obsah v těle během prvních 7 dnů, od okamžiku, kdy se projeví příznaky giardiózy. V tomto období se doporučuje studovat vzorky stolice.
Co je giardiáza
Giardiáza se týká onemocnění způsobených patogenními prvoky a doprovázených zhoršenou funkcí trávení. Léze se vyskytuje především na úrovni tenkého střeva, kde parazit narušuje procesy parietálního trávení. V klinice giardiózy je vedoucím gastrointestinální syndrom s projevy dyspeptické povahy. Laboratorní diagnostika je důležitou metodou pro potvrzení patologického procesu, umožňující včasnou léčbu onemocnění.
Příčiny giardiózy
Původcem infekce jsou Giardia, což jsou jednobuněční parazité patřící do třídy bičíků. V lidském střevě se mohou vyskytovat ve 2 formách, to znamená ve vegetativní (ve formě trofozoitů) a sporé (ve formě cyst). Trophozoiti žijí v horních částech tenkého střeva.
Parazit má osmotický typ výživy, to znamená, že přijímá potravu natrávenou hostitelem po celém povrchu těla. Taková životně důležitá aktivita Giardia narušuje funkci trávení a vyvolává vývoj patologických příznaků. Ve formě cyst žije Giardia v tlustém střevě a ve vnějším prostředí. Liší se životaschopností a odolností vůči ultrafialovému záření a působení nízkých teplot.
Přenosové trasy
Zdrojem nákazy giardiózou je nemocný člověk nebo přenašeč parazita, který cysty giardie vylučuje se stolicí do vnějšího prostředí. Mechanismus přenosu infekce je fekálně-orální. Nejčastěji dochází k přenosu patogenu prostřednictvím:
- běžné předměty pro domácnost;
- voda z vodovodu infikovaná cystami Giardia;
- nemytá zelenina a ovoce;
- s nedostatečnou tepelnou úpravou potravin;
- při porušování hygienických pravidel zejména v předškolních a školních zařízeních.
Ne poslední místo v přenosu Giardia patří hmyzu (mouchy, švábi), stejně jako zvířatům (kočky, psi). Jsou mechanickými přenašeči parazita, který se nachází na jejich těle, tlapkách, vlně.
Skutečnost infekce Giardií je ovlivněna imunitní reaktivitou střeva. Imunita organismu vůči parazitovi je možná. Cysty, které se dostaly do trávicího traktu a setkaly se s agresivním prostředím střeva, jím projdou a v nezměněné podobě se uvolní ven. Nemoci gastrointestinálního traktu, doprovázené nízkou kyselostí a poklesem enzymatické aktivity, zvyšují riziko infekce.
Klasifikace giardiózy
Giardiové cysty, vstupující do gastrointestinálního traktu, dosahují 12. dvanáctníku a proximálního jejuna, kde přecházejí do vegetativní formy přichycené ke klkům epitelu. Mechanický účinek parazita na střevní sliznici vyvolává narušení vstřebávání, podráždění nervových zakončení střevní trubice, změnu morfologické struktury buněčných struktur střevní výstelky.
V procesu života parazit uvolňuje specifický toxin, který má negativní vliv na nervový systém. Toto působení lamblie mění funkci gastrointestinálního traktu a vyvolává výskyt patologických příznaků. Podle klinických projevů giardiázy se rozlišují následující formy:
- střevní – postupuje s rozvojem duodenitidy, gastroenteritidy, enteritidy, duodeno-žaludečního refluxu, funkční poruchy střev;
- žlučovo-pankreatické – s převahou jevů biliární dyskineze, cholecystitida, cholangitida, reaktivní pankreatitida;
- extraintestinální – probíhá s fenomény neurocirkulační dystonie, asteno-neurotický syndrom, toxicko-alergické projevy.
Giardiáza může mít podle průběhu a závažnosti patologických příznaků akutní nebo chronický průběh.
Příznaky giardiázy
Debut onemocnění nastává 1-3 týdny poté, co Giardia vstoupí do těla a na konci inkubační doby. Vzhledem k tomu, že patogen parazituje ve střevě, klinické projevy v akutní fázi typického průběhu patologie začínají poškozením gastrointestinálního traktu a porušením jeho funkce, které se projevuje následujícími příznaky:
- pocity bolesti střední intenzity – bolest je pozorována nejčastěji v pupku a pravém hypochondriu. Svou povahou to může být křeče, připomínající záchvat apendicitidy nebo tahání;
- dyspeptické poruchy – nevolnost, periodické zvracení, nechutenství, říhání, pocit tíhy v břiše, někdy horečka až subfebrilie;
- porušení stolice – konzistence stolice se stává tekutou, pěnou a vodnatou povahou s nepříjemným zápachem. Frekvence stolice se zvyšuje na 3-5krát denně. Často je průjem nahrazen zácpou.
Akutní fáze parazitární infekce trvá až 1 týden. Na konci tohoto období se mohou klinické příznaky giardiázy zastavit a dochází k samoléčení. Pokud klinika přetrvává, patologický proces přechází do subakutního chronického průběhu.
Masivnost invaze parazitů, trvání a závažnost infekčního procesu ovlivňují stupeň syndromu intoxikace organismu. Může se objevit:
- vliv na centrální nervový systém – deprese nervového systému je doprovázena asteno-neurotickým syndromem (slabost, podrážděnost, nestabilita emočního pozadí, snížená schopnost pracovat);
- dermatologické projevy – vzniká suchost a olupování kůže, objevuje se folikulární keratóza, kopřivka doprovázená svěděním kůže, atopická dermatitida;
- vliv na vizuální analyzátor – projevuje se blefaritidou, konjunktivitidou, cheilitidou (zánětlivý proces, který postihuje červený okraj, sliznici a kůži rtů), které jsou náchylné k dlouhému a trvalému průběhu.
Na pozadí giardiázy pacienti trpící onemocněním dýchacího systému (bronchiální astma, astmatická bronchitida) zaznamenávají trvání exacerbací a zkrácení doby remise.
Diagnóza giardiózy
Vzhledem k tomu, že parazitární infekce je charakterizována řadou klinických projevů, jsou sérologické testy ke stanovení Giardia antigenu ve střevním obsahu na prvním místě v diagnostice.
Včasná detekce parazita v těle a léčba giardiózy umožní zabránit a vyhnout se přechodu onemocnění do chronické formy, odstranit patologické příznaky a obnovit funkci trávicího systému.
